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二氧化碳培養箱做細胞培養及凍存

實驗材料二氧化碳培養箱、液氮罐、超低溫低溫冰箱、電熱恒溫水浴鍋、離心機等。培養皿、滴瓶、吸管、離心管、燒杯、量筒、三角瓶、培養瓶等下面喆圖小編給大家說下簡易的實驗步驟將凍存細胞從液氮中取出后，在37℃電熱恒溫水浴鍋內不斷搖動促進其融化。移入15ml離心管中，加入10ml預熱的DMEM*培養基，輕輕吹勻，離心2min，棄上清液。加入10mlDMEM培養基清洗，棄上清液。加入10mlDMEM*培養基，輕輕吹打，接種于10cm盤中，在含5%CO2的二氧化碳培養箱中培養。細胞密度達到...

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用帖壁法純化巨噬細胞

1．用含20％～40％小牛血清的RPMI-1640培養液將巨噬細胞配成2×106～4×106/ml的濃度。以每平方厘米2×105～4×105個巨噬細胞的密度將細胞懸液接種到玻璃培養皿（瓶）或塑料培養皿（瓶）中。37℃5％CO2的飽和水汽二氧化碳培養箱中培養1小時或24小時。1小時培養節省時間但會丟失一些粘附力弱的巨噬細胞，而24小時可以得到較多的巨噬細胞。20％～40％的小牛血清可以減少B淋巴細胞的粘附。2．搖晃培養皿（瓶），懸浮未粘附細胞，吸出細胞懸液。用預溫的Hanks液...

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羊水細胞培養

羊水中含有胎兒脫落的上皮細胞，可在體外培養用以分析胎兒染色體核型。目前國內外大都采用腹腔羊膜穿刺術，妊娠12-30周的羊水細胞均可培養成功。羊膜腔穿刺取羊水行染色體分析，最佳孕周為16周左右。因此時羊水增長快，羊水中細胞較多，細胞培養易于生長，而且不易損傷胎兒。國內多數選擇的穿刺時間在妊娠的第16-30周。國外現已較多地采用妊娠早期的羊膜穿刺，但需在B超下定位及穿刺。羊水量按妊娠時間大致計算（1ml/w）。資料表明，穿刺病例的妊娠結局、分娩方式、胎兒的出生體重等與未穿刺無明顯...

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靶細胞殺傷實驗：LDH法

一、效應細胞的制備激惹5天后，于無菌條件下取出受鼠引流的腹股溝淋巴結，100目鋼網研磨，調整細胞濃度為2×107.ml-1。臺盼藍色要求存活率95%。二、靶細胞的制備P815細胞株系DBA/2小鼠的肥大細胞瘤細胞株。連續傳代培養，調整細胞濃度為2×105/ml或3.33×105/ml（加入α-Lyt2mAb時的靶細胞濃度），臺盼藍染色成活率95%。三、LDH釋放法測定CTL的功能按表1加樣于96孔培養板中，設3個復孔。混勻置二氧化碳培養箱中孵育4h。室溫離心，用微量加樣器每孔...

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研究T細胞產生的細胞因子的3種方法

1）研究細胞因子mRNA的方法絕大多數細胞因子mRNA在T細胞中只短暫存在，其存在的量與T細胞產生細胞因子的量也有很好的相關性。所以，在大多數情況下，細胞內mRNA的量可以反映細胞產生細胞因子的情況。檢測細胞因子mRNA的試驗主要有：競爭性聚合酶鏈反應、Northern印跡雜交、斑點雜交、逆轉錄聚合酶鏈反應、原位雜交。2）研究細胞因子的免疫檢測法免疫檢測法主要有放射免疫檢測法、酶免疫測定法、免疫熒光測定法和免疫發光測定法等。3）研究細胞因子的生物學方法1．用含10％小牛血清的...

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噬神經元的腺病毒載體的構建

實驗試劑人類胚胎腎（HEK）293T細胞腺病毒轉移載體質粒腺病毒包裝載體PLP1，pLP2（之前），PLP/VSVGDMEM培養基青霉素，鏈霉素-谷氨酰胺（100X）磷酸鹽緩沖液PBS（-）胎牛血清凝聚胺實驗設備10-cm的細胞培養皿50毫升錐形離心管Steriflip-GP過濾器（0.22微米）超離心管17.0mL5％二氧化碳培養箱熒光顯微鏡生物安全柜離心機實驗材料2.5M氯化鈣溶液：36.75克氯化鈣，70毫升雙蒸H2O，通過0.22μm濾膜過濾，體積調制100毫升...

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細胞介導細胞毒作用檢測法：時間分辯熒光分析法

時間分辯熒光分析法1）銪熒光檢測法標記靶細胞1．EuCl3的制備：稱取58.08mgEu2O3，用少量1NHCl攪拌至溶解，再用1NNaOH調節pH至4.0。加雙蒸水配成33～100mmol/L的保存液，4℃保存備用。2．用預冷的標記液將靶細胞濃度調整到5×106/ml，加50μl10mg/ml硫酸葡聚糖，置冰浴中20分鐘，其間搖晃數次。3．加入30μl100mmol/LCaCl2溶液終止反應5分鐘。4．用含2mmol/LCaCl2的RPMI-1640培養液洗滌細胞5次。用含...

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NAG檢測法檢測細胞生長

1．按MTT檢測法培養細胞和用不同稀釋度的細胞因子處理細胞。2．吸去培養液，用PBS洗滌兩次（如為懸浮細胞，應在吸去上清液前先離心）。3．每孔加60μlNAG染液，在37℃5％CO2的飽和水汽二氧化碳培養箱中培養4小時。4．每孔加90μl終止液，混勻后置酶聯檢測儀上測定光密度（OD）值，檢測波長402nm。以OD值對樣品稀釋度作圖，比較標準曲線和待測樣品曲線即可求得待測樣品中細胞因子的含量。

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